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畜牧人

標(biāo)題: 討論一下酶標(biāo)儀檢測(cè)三聚氰胺的實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性 [打印本頁]

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-2 12:09
標(biāo)題: 討論一下酶標(biāo)儀檢測(cè)三聚氰胺的實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性
我最近用酶標(biāo)儀做了幾次檢測(cè)三聚氰胺的實(shí)驗(yàn)，試劑盒里的標(biāo)準(zhǔn)樣品在規(guī)定范圍內(nèi)，可是樣品的數(shù)據(jù)差別較大，請(qǐng)問有哪位也做過這個(gè)實(shí)驗(yàn)，交流一下可以嗎？

作者: chen98448 時(shí)間: 2008-12-2 13:45
呵呵，好象Cargill現(xiàn)在也在用這種方法，準(zhǔn)確性到底怎么樣還不清楚，我們也想買??！

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-2 14:19
我們也剛做了幾個(gè)樣品，成本太高了，一個(gè)試劑盒做不了幾個(gè)樣品，平均一次實(shí)驗(yàn)就得一千多塊錢，做這樣的實(shí)驗(yàn)實(shí)在點(diǎn)奢侈

作者: 月亮花 時(shí)間: 2008-12-2 23:41
你的試劑盒也太貴了吧,一般96個(gè)板孔的才不到4000元的,刨去標(biāo)準(zhǔn)4個(gè),可以做不少的,不做重復(fù)做的更多.
去年我們就使用了測(cè)定大量的飼料原料.
假陽性主要與樣品的酸堿度有關(guān).酸性的原料或在提取時(shí)使用酸性甲醇提取時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽性的.需要具體情況可交流.

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-3 09:47
請(qǐng)問月亮花，我們是72孔的，你們買得哪個(gè)生產(chǎn)廠家的試劑盒？我們買得是北京的，
還有標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量是有限的，如果藥品用完了，還有板孔怎么辦？（不是說同一試劑盒里是配套的，不能和其他的試劑盒混用嗎？）

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-3 09:49
不好意思剛才看錯(cuò)了，也是96孔的

作者: glory143 時(shí)間: 2008-12-3 14:34
我們也準(zhǔn)備做呢，用的美國的BEACON的
等出了結(jié)果再討論

作者: glory143 時(shí)間: 2008-12-3 14:35
對(duì)了，大家能不能把前處理的方法都貼出來??？？我發(fā)現(xiàn)很多公司提供的方法都是不一樣的，大家可以討論下方法

作者: glory143 時(shí)間: 2008-12-3 14:42
拿提取溶劑來說，有的用60%的甲醇/水，有的用純甲醇，有的用純20mMPBS，真是五花八門
各位都用的什么？

作者: 柳粒橙 時(shí)間: 2008-12-3 14:54
不知道這種方法的準(zhǔn)確性怎樣？我公司也打算做，而且有許多公司在推銷試劑盒，我還是擔(dān)心這個(gè)試劑盒方法的準(zhǔn)確率。因?yàn)橐郧拔野l(fā)現(xiàn)用試劑盒的方法測(cè)定毒素，其穩(wěn)定性不怎么好，準(zhǔn)確率不高，也不知道是什么原因？

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-3 16:37
我用的60%甲醇提取液

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-3 16:40
我們初步來做穩(wěn)定性不是很好，準(zhǔn)確率因?qū)嶒?yàn)的次數(shù)太少現(xiàn)在很難說，我再多做幾次后，和大家交流吧相信會(huì)有結(jié)果的

作者: 月亮花 時(shí)間: 2008-12-3 22:15

原帖由 wanglinlin 于 2008-12-3 09:47 發(fā)表
請(qǐng)問月亮花，我們是72孔的，你們買得哪個(gè)生產(chǎn)廠家的試劑盒？我們買得是北京的，
還有標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量是有限的，如果藥品用完了，還有板孔怎么辦？（不是說同一試劑盒里是配套的，不能和其他的試劑盒混用嗎？）

一般標(biāo)準(zhǔn)品夠用的，如果你每次都使用重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)而且次數(shù)多，可能會(huì)不夠。同一批次的標(biāo)準(zhǔn)可以混用的，用不完的板條只要和標(biāo)準(zhǔn)的板條一樣，結(jié)果沒有多大影響的，因?yàn)槭褂玫氖窍鄬?duì)比值。

我們的盒子是美國產(chǎn)的，也是北京的代理商買的。

我每次就做一個(gè)板孔，不重復(fù)的，包括標(biāo)準(zhǔn)，你可以通過與標(biāo)準(zhǔn)顏色的差異大體判斷污染情況。

當(dāng)然由于一切影響抗體和酶結(jié)合的因素會(huì)影響結(jié)果如酸、堿、強(qiáng)離子、溫度會(huì)對(duì)結(jié)果有影響。還有，提取方法中提取率也是一個(gè)問題，不能使用液相或液質(zhì)類似的方法提取，單純的甲醇或60%甲醇水提取率不高，如果樣品與提取液的比例不當(dāng)，也不能完全提取出。如果使用含有酸的提取液，或樣品酸性強(qiáng)，會(huì)造成假陽性，而堿性的樣品會(huì)造成假陰性。

我們花了很多時(shí)間和錢財(cái)才搞清這些問題。

作者: chenchen123 時(shí)間: 2008-12-4 08:39
我們送檢測(cè)部門檢測(cè)，同一個(gè)樣檢出不同的判斷結(jié)果，弄得我們都不知道怎么判定，最后只好再花大價(jià)錢定量檢測(cè)了。

作者: whm0728 時(shí)間: 2008-12-4 10:46
@@004: @@004: 有點(diǎn)亂，有點(diǎn)亂。
可惡的三聚氰胺。

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-4 11:27
請(qǐng)問月亮花,能把你的提取方法的過程詳細(xì)說一下嗎?謝謝

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-4 11:45
請(qǐng)問月亮花,能把你們提取方法過程詳細(xì)的說一上嗎?
還有酶標(biāo)儀在讀數(shù)時(shí),讀完一遍后重新讀時(shí)發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)就有變化,(中間間隔3-5分鐘) 是怎么回事?

作者: 月亮花 時(shí)間: 2008-12-4 18:45

原帖由 wanglinlin 于 2008-12-4 11:27 發(fā)表
請(qǐng)問月亮花,能把你的提取方法的過程詳細(xì)說一下嗎?謝謝

我們目前使用純甲醇按1：10提取，然后取100微升再稀釋10-20倍，這樣2-50ppm的污染大體就可以測(cè)定了。需要有空白和陽性對(duì)照以控制檢測(cè)質(zhì)量。
由于是顯色反應(yīng)，色源物質(zhì)會(huì)在一定時(shí)間內(nèi)發(fā)生變化的，可以立即讀數(shù)，發(fā)生變化也不影響結(jié)果，因?yàn)橐鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及吸光度相對(duì)比值計(jì)算結(jié)果的。

作者: cuger-321 時(shí)間: 2008-12-4 19:40
請(qǐng)教月亮花：當(dāng)你們遇到假陽性怎么辦呢？在操作中能否避免假陽性？知道的朋友可以研究哈；

作者: cuger-321 時(shí)間: 2008-12-4 19:45
我們剛測(cè)的時(shí)候也遇到不少問題，電話質(zhì)詢了BEACON的試劑盒公司，針對(duì)干寵物飼料提供了新的萃取方法，明天發(fā)給大家哈，

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-5 15:11
請(qǐng)教月亮花。酶標(biāo)儀使用前需要預(yù)熱嗎？

作者: wanglinlin 時(shí)間: 2008-12-5 15:26
月亮花，可不可以把你具體實(shí)驗(yàn)操作步驟給貼下來，（物別是每一步需注意的事項(xiàng)）特別是空白等對(duì)照實(shí)驗(yàn)，（因?yàn)槲医裉煊肿隽艘槐闃?biāo)準(zhǔn)還行，可以其他的樣品數(shù)據(jù)有點(diǎn)不太可信）。

還有，酶標(biāo)儀在使用前需要預(yù)熱嗎？

不好意思麻煩了

作者: 月亮花 時(shí)間: 2008-12-6 14:42

原帖由 cuger-321 于 2008-12-4 19:40 發(fā)表
請(qǐng)教月亮花：當(dāng)你們遇到假陽性怎么辦呢？在操作中能否避免假陽性？知道的朋友可以研究哈；

為避免假陽性，要對(duì)不同的樣品分類檢測(cè)，根據(jù)已經(jīng)確定有或沒有污染的樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢查造成假陽性的原因。一般是槍頭污染、提取管污染、提取方法污染及提取液本身造成等原因。

作者: 月亮花 時(shí)間: 2008-12-6 14:46

原帖由 wanglinlin 于 2008-12-5 15:11 發(fā)表
請(qǐng)教月亮花。酶標(biāo)儀使用前需要預(yù)熱嗎？

應(yīng)該預(yù)熱至少半小時(shí)吧，以便光源穩(wěn)定設(shè)備處于良好狀態(tài)。

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