畜牧人
標(biāo)題: 三聚氰胺的檢測(cè)方法！ [打印本頁]
作者: 韓新華 時(shí)間: 2008-10-2 04:53
標(biāo)題: 三聚氰胺的檢測(cè)方法！
請(qǐng)大家看看這幾種方法對(duì)大家是否有用？
作者: 韓新華 時(shí)間: 2008-10-2 04:56
三聚氰胺的檢測(cè)方法（山東六和集團(tuán)）
三聚氰胺簡稱三胺, 別名蜜胺、氰尿酰胺, 分子式:C3N6H6, 分子量: 126.12, 是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料。物理性能: 白色結(jié)晶粉末, 無味, LD50( 半數(shù)致死量) :4550 mg/kg(小鼠經(jīng)口); 3000 mg/kg(大鼠經(jīng)口), 相對(duì)密度:1570 kg/m3。熔點(diǎn): 在常壓下, 354℃分解。升華溫度:300℃。溶解性: 能溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶; 微溶于水、乙醇; 不溶于乙醚、苯和四氯化碳。水溶液呈弱堿性。化學(xué)性能: 三聚氰胺顯弱堿性, 能夠與各種酸反應(yīng)生成三聚氰胺鹽。在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿液中, 三聚氰胺發(fā)生水解, 胺基逐步被羥基取代, 生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。三聚氰胺與醛類反應(yīng)生成加成化合物。其中三聚氰胺與甲醛水溶液的反應(yīng)是最重要的反應(yīng)。
很多飼料廠控制飼料原料時(shí), 基于條件所限, 常用凱氏定氮方法測(cè)定粗蛋白的含量, 因?yàn)閯P氏定氮只能測(cè)出含氮量而無法測(cè)出氮的來源, 加上蛋白質(zhì)原料價(jià)格比常規(guī)的谷物原料要高很多, 為謀取不當(dāng)?shù)美蛷浹a(bǔ)飼料原料中蛋白含量低的問題, 不法商人常常加入非蛋白原料, 如工業(yè)尿素、二脲等非蛋白氮而冒充粗蛋白質(zhì)。對(duì)于加入尿素以及尿素類成品可以通過檢測(cè)氨氮的方法檢測(cè)出來, 而三聚氰胺不溶解在水里, 抗氨氮測(cè)定, 所以一般的飼料分析化驗(yàn)部門也很難分析出來。有時(shí)在化驗(yàn)一些蛋白質(zhì)原料時(shí), 蛋白質(zhì)含量高, 而氨基酸含量低, 也可能是加入三聚氰胺。另外, 三聚氰胺含氮量為66.6%, 折合成粗蛋白含量為416.27%, 摻入少量就可以迅速提高蛋白含量。加上三聚氰胺為白色粉末, 易被染色, 很容易混入原料中而不被發(fā)現(xiàn)。三聚氰胺通常被摻入蛋白飼料中, 如大豆蛋白粉、魚粉、肉骨粉、玉米蛋白粉以及餅粕類原料等。三聚氰胺是一種有機(jī)化工產(chǎn)品, 不是國家許可的飼料和食品添加劑, 加入飼料原料中對(duì)人和動(dòng)物產(chǎn)生的危害也在進(jìn)一步研究中。
工業(yè)上測(cè)定三聚氰胺的純度通常采用苦味酸法和升華法。苦味酸法方法原理: 將水加入試樣, 加熱溶解后, 加人苦味酸溶液, 稱量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的質(zhì)量, 即測(cè)得三聚氰胺純度含量。分析步驟: 稱取試樣, 置于500 ml 錐形瓶中, 同時(shí)加入水, 加熱溶解; 冷卻后, 加入酚酞指示液3 滴, 若顯色, 加入硫酸溶液, 直至溶液顏色消失, 若有不溶物, 需過濾, 水洗; 把濾液和洗液合并, 移入500 ml 容量瓶中, 加水至刻度, 仔細(xì)振搖混合后, 準(zhǔn)確吸取100 ml 置于500 ml 燒杯里; 將此溶液加熱至80℃, 另加入已加熱至80℃的100 ml 苦味酸溶液, 冷卻至室溫后, 保持在15℃以下約8 小時(shí); 用已恒重的玻砂過濾器過濾, 之后,先用約100 ml 苦味酸三聚氰胺的飽和溶液洗滌, 再用水洗; 烘干玻砂過濾器, 置于干燥器中冷卻后, 稱量求得沉淀物質(zhì)量。升華法測(cè)定原理: 在升華裝置中將試樣在負(fù)壓下進(jìn)行加熱, 讓三聚氰胺完全升華后, 稱其殘?jiān)?/font>, 即測(cè)得三聚氰胺純度。分析步驟: 稱取試樣, 置于預(yù)先干燥了的且已知質(zhì)量的試樣容器里; 將試樣容器置入減壓升華裝置內(nèi),待完全密閉后, 開啟真空裝置緩緩吸引, 并調(diào)節(jié)裝置內(nèi)的
溫度, 經(jīng)2 小時(shí)升華結(jié)束; 取出試樣容器, 冷至室溫后, 稱量試樣容器的質(zhì)量。上述兩種測(cè)定方法準(zhǔn)確度均較高, 但操作繁瑣, 分析時(shí)間太長,有人推薦采用電位滴定法。具體測(cè)定方法, 首先測(cè)定三聚氰胺溶液中總固體的含量, 稱取樣品于200 ml燒杯中, 加入100 ml 蒸餾水, 放于石棉網(wǎng)的電爐上加熱,在沸騰的情況下攪拌溶液, 使試樣完全溶解。在電磁攪拌狀態(tài)下, 用硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定熱溶液至pH 值為5 左右。流水冷卻溶液至室溫, 滴定, 每次準(zhǔn)確加入0.1 ml 硫酸標(biāo)液,并記下相應(yīng)的pH 值, 直至pH 值約為3。計(jì)算出等當(dāng)量點(diǎn)時(shí)消耗硫酸標(biāo)液的體積。結(jié)果計(jì)算按公式Me=S×6.307×V×F /m ( 其中式中:Me 為溶液中三聚氰胺的含量, %; S 為溶液中總固體的含量, %; V 為等當(dāng)量點(diǎn)時(shí)消耗硫酸標(biāo)液的體積, ml; F 為0.5 mol /L 硫酸標(biāo)液的校正系數(shù); m 為滴定時(shí)所標(biāo)取總固體的質(zhì)量; 6.307 為換算系數(shù)) 。
作者: 韓新華 時(shí)間: 2008-10-2 05:00
標(biāo)題: 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)征集稿（三聚氰胺檢測(cè)）
飼料中三聚氰胺的測(cè)定
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜質(zhì)譜法（GCMS）測(cè)定飼料中三聚氰胺的方法。高效液相色譜法為篩選法，氣相色譜質(zhì)譜法為確證法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料，預(yù)混料、濃縮飼料、飼料添加劑、植物性蛋白粉、寵物飼料中三聚氰胺的測(cè)定，方法最低定量限高效液相色譜法和氣相色譜質(zhì)譜法分別為2.0mg/kg和0.05mg/kg，高效液相色譜的最低檢測(cè)濃度分別為0.5mg/kg。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
第一法 高效液相色譜法
3 原理
試樣中的三聚氰胺用1％三氯乙酸提取，離心后取部分提取液，用陽離子交換柱凈化，洗脫物用具有二極管陣列檢測(cè)器的高效液相色譜儀進(jìn)行定量。
4 試劑與材料
除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?。水為蒸餾水，色譜用水符合GB/T 6682一級(jí)用水的規(guī)定。
4.1 甲醇：色譜純。
4.2 乙睛：色譜純。
4.3 氨水。
4.3 陽離子交換柱(SPE柱)：60mg，3mL或150mg，6mL。
4.4 1％三氯乙酸：稱取10g三氯乙酸溶解于1000mL水中。
4.5 5％氨化甲醇：量取5mL氨水，溶解于100mL甲醇中。
4.6乙酸鉛溶液（ρ（PbAc2）=22g/L）：取22g乙酸鉛用約300mL水溶解后定容至1L。
4.7 濾膜：0.45m，有機(jī)相
4.8 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（﹥99.0％）
4.9 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1mg/mL）：稱取100mg（精確到0.1mg）的標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇/水（2:8，V:V）溶解并定容于100mL容量瓶中。
4.10 標(biāo)準(zhǔn)工作液：標(biāo)準(zhǔn)工作液按照需要逐級(jí)稀釋配制。
5 儀器與設(shè)備
5.1 高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測(cè)器。
5.2 離心機(jī)：10000rpm
5.3 渦旋混合器
5.4 氮吹儀
5.5 固相萃取裝置
5.6 高速勻質(zhì)器
5.7 索式提取器
6 測(cè)定步驟
6.1 提取
6.1.1 植物蛋白和飼料中三聚氰胺的提取
稱取5.0g樣品，準(zhǔn)確加入48ml1％的三氯乙酸溶液，加入2mL飽和醋酸鉛溶液。搖勻，超聲提取20min。取提取液約30mL轉(zhuǎn)入離心管，在10000rpm離心機(jī)上離心5min。
6.1.2 寵物飼料中三聚氰胺的提取
稱取5.0g樣品，在索式提取器中用乙醚回流6h去除脂肪。脫脂殘?jiān)鼫?zhǔn)確加入48ml1％的三氯乙酸溶液，加入2mL飽和醋酸鉛溶液。搖勻，超聲提取20min。取提取液約30mL轉(zhuǎn)入離心管，在10000rpm離心機(jī)上離心5min。
6.2 凈化
MCX柱活化和上樣：分別用3ml甲醇，3ml水活化MCX柱，準(zhǔn)確移取10mL離心液分次上柱。再用3ml水和3ml甲醇洗滌MCX柱，抽近干后用5％氨化甲醇溶液（4.5）3ml洗脫。洗脫液于氮吹儀上50℃氮吹至干，用2+8甲醇水定容，過0.45m濾膜，濾液用于液相色譜測(cè)定。
6.3 測(cè)定
6.3.1液相色譜條件
色譜柱：C8柱，1504.6mm(i.d)，5m；
柱溫：室溫
流動(dòng)相：10+90（乙腈：10mM庚烷磺酸鈉，10mM檸檬酸緩沖液）
檢測(cè)波長：240nm
進(jìn)樣量：20L
根據(jù)試樣中被測(cè)物的含量情況，選取響應(yīng)值適宜的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行色譜分析，按照保留時(shí)間和二極管陣列的紫外光譜進(jìn)行定性，標(biāo)準(zhǔn)工作液應(yīng)有五個(gè)濃度水平。標(biāo)準(zhǔn)工作液和待測(cè)樣液中三聚氰胺的響應(yīng)值應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。
6.4 結(jié)果計(jì)算和表述
按照下式計(jì)算試樣中三聚氰胺的含量：
式中：
W－試樣中三聚氰胺的含量，單位為毫克每公斤（mg/kg）；
V－樣品最終定容體積，單位為克（g）；
c－由標(biāo)準(zhǔn)曲線而得的樣液中三聚氰胺的含量，單位為微克每升（g/L）；
m－試樣量，單位為克（g）。
n — 稀釋倍數(shù)。
6.5 結(jié)果表示
平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
7重復(fù)性
在同一實(shí)驗(yàn)室由同一操作人員使用同一儀器完成的兩個(gè)平行測(cè)定的相對(duì)偏差不大于10%
氣相色譜－質(zhì)譜法（確證法）
8 方法提要
試樣中的三聚氰胺用1％三氯乙酸提取，用陽離子交換柱凈化，用BSTFA衍生化，用氣相色譜-質(zhì)譜進(jìn)行定性和定量分析。
9 試劑和材料
衍生化試劑：N,O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）
其他同5
10 儀器和設(shè)備
氣相色譜-質(zhì)譜，其它同6
11 分析步驟
前處理同6.1和6.2
11.1 衍生化
將6.2的凈化液吹干，加入200L的吡啶和200L的BSTFA，混勻，在70℃衍生30min。同時(shí)用三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)系列做同步衍生。
測(cè)定
11.2 氣相色譜－質(zhì)譜條件
柱子：DB-5MS柱
載氣：He 流速: 1.3 ml/min 平均線性速度: 35 cm/sec 壓力: 17.5 psi (initial) 模式: 恒流
進(jìn)樣：不分流或分流進(jìn)樣 (1:20)，進(jìn)樣體積為1µl，進(jìn)樣溫度: 250ºC
升溫程序：起始溫度為75ºC，持續(xù)1.0 min，以30ºC/min升溫至300ºC，保持2.0 min。傳輸線溫度為280 ºC。
運(yùn)行時(shí)間: 10.5 min
質(zhì)譜條件：質(zhì)量范圍: 40-450 amu
掃描模式：全掃描 (Electron Ionization)
溶劑延遲: 4.2 min (splitless); 3.8 min (split)
四極桿: 150ºC
離子源: 230ºC
監(jiān)測(cè)離子：特征離子 171，99，73；分子離子：327，342
11.3 定性定量方法
定性方法：樣品與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于0.5%。特征離子基峰百分?jǐn)?shù)與標(biāo)準(zhǔn)品相差不大于20％。
定量方法：選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）法計(jì)算峰面積，單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)法定量。
12 結(jié)果結(jié)算和表述
按照下式計(jì)算試樣中三聚氰胺的含量：
式中：
W－試樣中三聚氰胺的含量，單位為毫克每公斤（mg/kg）；
V－樣品最終定容體積，單位為克（g）；
c－由標(biāo)準(zhǔn)曲線而得的樣液中三聚氰胺的含量，單位為微克每升（g/L）；
m－試樣量，單位為克（g）。
平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
13 允許差
取平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，兩個(gè)平行測(cè)定的相對(duì)偏差不大于20％。
作者: songping 時(shí)間: 2008-10-2 10:37
國家也在征集好的方法，關(guān)鍵是實(shí)用，易操作，氣相液相一般的做不來的
作者: wangliguo429 時(shí)間: 2008-10-4 17:26
正需要，謝樓主提供:xuehu:
作者: wfcllyb 時(shí)間: 2008-10-4 18:18
方法不錯(cuò)，但樓主是不是在第三樓將計(jì)算公式給忘了！
作者: 毅石 時(shí)間: 2008-10-5 12:34
查過一些文獻(xiàn)，大都用氣相色譜。一般的飼料企業(yè)做不到的！
作者: laomo7909 時(shí)間: 2008-10-5 12:53
我覺得現(xiàn)在我們已經(jīng)不是研究怎么測(cè)三聚氰胺了，最需要研究的是怎么改進(jìn)測(cè)蛋白的方法。在這個(gè)摻假橫飛的年代，利用傳統(tǒng)的方法測(cè)粗蛋白還能代表什么？只能帶來對(duì)人們生活的傷害，國家不顧勞動(dòng)人們的死活，一生令下，奶牛只能把白白的牛奶給倒掉，只能是讓世界人民看中國人的消化，只能是讓“made in china”成為假貨的代名詞?？杀 ?hr noshade size="2" width="100%" color="#808080">
作者: xnkiller 時(shí)間: 2008-10-5 13:14
就是這個(gè)檢測(cè)方法，但是這個(gè)方法的成本非常高，重要的是原料控制和和科學(xué)合理的管理
作者: 新新寶貝 時(shí)間: 2008-10-5 14:12
這樣的話,我們只能用一些常規(guī)的大眾原料,那些當(dāng)?shù)氐囊恍┖玫碾s粕等原料不敢用就真的是可惜
作者: 韓新華 時(shí)間: 2008-10-5 22:42
標(biāo)題: 回復(fù) 12樓 xnkiller 的帖子
現(xiàn)在有這種檢測(cè)設(shè)備，最便宜的3萬多。:huahua: :huahua: :huahua:
作者: shyjkl 時(shí)間: 2008-10-6 16:12
這是定量測(cè)定,請(qǐng)問樓主有沒有定性測(cè)定啊?
作者: 實(shí)在是高 時(shí)間: 2008-10-9 15:35
有經(jīng)驗(yàn)的朋友能不能把定性檢驗(yàn)的方法說下呀
作者: 楊青 時(shí)間: 2008-10-9 15:54
哈哈哈,還是提高飼料企業(yè)的準(zhǔn)入門檻就搞定了呀,要求所有的飼料企業(yè)必須配備氣相或液相色普儀,就象分光光度計(jì)一樣,我想這些問題就都能搞定了
作者: 實(shí)在是高 時(shí)間: 2008-10-9 16:17
小企業(yè)想活下來已經(jīng)不如意了，其實(shí)最好還是用最簡單的方法做最有用的實(shí)驗(yàn)，我們只是想看看我們?cè)虾统善妨嫌袥]有三聚氰胺，趕在畜牧局前面知道真相．送建一個(gè)就３００塊，肉疼呀:kelian:
作者: 萌萌1108 時(shí)間: 2008-10-10 17:05
說的也是，飼料廠本身利潤就很薄，那么貴的設(shè)備利用率又低，單純測(cè)一個(gè)三聚氰胺感覺有點(diǎn)不值。但送檢又時(shí)間長價(jià)格也不低，矛盾啊
作者: gsj 時(shí)間: 2008-10-10 17:46
確實(shí)是這樣啊，摻假厲害啊
作者: 萌萌1108 時(shí)間: 2008-10-18 14:42
請(qǐng)教一下樓主，檢測(cè)中要用到氮吹儀的，買了氮吹儀了，是不是還得配一個(gè)氮?dú)夤薨?hr noshade size="2" width="100%" color="#808080">
作者: szhilei 時(shí)間: 2008-10-18 14:54
原帖由 韓新華 于 2008-10-2 04:56 發(fā)表 
三聚氰胺的檢測(cè)方法（山東六和集團(tuán)）1 三聚氰胺的性質(zhì)
三聚氰胺簡稱三胺, 別名蜜胺、氰尿酰胺, 分子式:C3N6H6, 分子量: 126.12, 是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料。物理性能: 白色結(jié)晶粉末, 無味, LD50( 半數(shù)致死量
山東省畜牧獸醫(yī)局印制的三聚氰胺小知識(shí)手冊(cè)里面全有的，很詳細(xì)，山東的到當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)部門就應(yīng)該可以領(lǐng)一本的！
作者: baochengyun 時(shí)間: 2008-10-20 07:30
我們集團(tuán)在發(fā)生三聚氰胺事件以前就一直在原料檢驗(yàn)中注意了，特別是顯微鏡檢驗(yàn)，我們已經(jīng)有兩種方法檢驗(yàn)三聚氰胺 方便實(shí)用
作者: piaoyi 時(shí)間: 2008-10-20 07:58
我想問一下，用顯微鏡能觀察到嗎？我以前用顯微鏡怎么看不到啊，
作者: lzq82 時(shí)間: 2008-10-20 09:16
標(biāo)題: 回復(fù) 23樓 baochengyun 的帖子
能不能把你的這個(gè)簡便方法讓大家共享一下！
作者: 實(shí)在是高 時(shí)間: 2008-10-20 14:31
對(duì)呀，２３樓的把你的方法說下，我們很想學(xué)習(xí)一下
作者: 柳粒橙 時(shí)間: 2008-10-20 15:49
是啊，有這種定性方法或者顯微鏡方法鑒別對(duì)于飼料廠來說最實(shí)用了，能否大家說的明白些呢？我也想學(xué)習(xí)下。
作者: falconqj 時(shí)間: 2008-10-20 22:43
學(xué)習(xí)，這么多學(xué)問值得學(xué)習(xí)
作者: 三劍 時(shí)間: 2008-10-20 22:57
標(biāo)題: 好
很好，非常好，很好
作者: yuanfang 時(shí)間: 2008-10-21 10:27
今天三聚氰胺，明天指不定出啥東西了，現(xiàn)在只有測(cè)氨基酸含量了，但成本又高，難道對(duì)產(chǎn)假就無可奈何了？人真的是太聰明了，假貨滿天飛。害人害己！??！
作者: 實(shí)在是高 時(shí)間: 2008-10-21 11:48
我都稀罕了國人的聰明怎么全都用到這上面了
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